Wirksamkeit verschiedener Multityrosinkinase-Inhibitoren und des Epothilon B-Derivates ZK219477 (Sagopilon) alleine und in Kombination in humanen Tumorzelllinien

Abstract

Die vorliegende Dissertation hatte die Zielsetzungen, das zytotoxische Potential 5 verschiedener Tyrosinkinase-Inhibitoren (TKI) und von dem Epothilon B-Derivat Sagopilon alleine oder in Kombination sowie den Einfluss der TKI auf den Zellzyklus und die Proteinexpression näher zu untersuchen. Die Versuche wurden an 4 verschiedenen humanen Tumorzelllinien durchgeführt. Die Charakterisierung des zytotoxischen Potentials erfolgte mit Hilfe des Sulforhodamin B-Zytotoxizitätsassays. Das Verhalten von behandelten Tumorzellen im Zellzyklus wurde mittels Durchflusszytometrie untersucht. Der Einfluss einer Behandlung mit Tyrosinkinase-Inhibitoren auf die Expression von Wachstumsfaktorrezeptoren wurde mittels Western Blot-Analysen erfasst. Die TKI zeigten ein unterschiedliches zytotoxisches Potential. Die TKI AEE788, GW572016, ZD6474 und ZD1839 induzierten einen G1-Arrest im Zellzyklus, während NVP-AEW541 umgehend Apoptose auslöste. Eine Inhibierung der Phosphorylierung von Wachstumsfaktorrezeptoren konnte im Western-Blot nur partiell nachgewiesen werden. Die Kombination von Sagopilon mit den verschiedenen TKI wirkte bei paralleler Applikationsweise überwiegend synergistisch, während die Applikation der TKI vor Sagopilon vornehmlich antagonistisch wirkte.

The aims of this work were first to characterize the cytotoxicity of 5 different tyrosine kinase inhibitors (TKI) and of the epothilone B-derivate sagopilone alone or in combination and second to investigate the tyrosine kinase inhibitor influence on the cell cycle and the protein expression. The experiments were performed using 4 different human tumor cell lines. Sulforhodamin B assay was performed for evaluation of cytotoxicity. The reaction of treated cells in cell cycle was analysed by using flow cytometry. The influence of TKI on protein expression was performed by using western blot. The TKI showed a different cytotoxic potential. The TKI AEE788, GW572016, ZD6474 und ZD1839 induced a G1 phase cell cycle arrest, whereas NVP-AEW541 induced apoptosis. An inhibition of phosphorylated forms of growth factor receptors was rarely seen. The combination of sagopilon with different TKI showed a synergistic effect in simultaneous application, whereas the application of sagopilon before TKI resulted in antagonistic effects.