Strukturelle und funktionelle Analyse des mRNA-3‘-Prozessierungs-Komplexes

Abstract

Während der Reifung von mRNA wird diese am 3‘-Ende gespalten und polyadenyliert. Dieser Prozess wird von einem Multiproteinkomplex katalysiert. In dieser Arbeit wurden die bisher bekannten und an der mRNA-3‘-Prozessierung beteiligten Proteinkomplexe gereinigt, biochemisch charakterisiert und mittels cross-linking und Massenspektrometrie strukturell untersucht. Die erhaltenen Strukturinformationen wurde genutzt, um durch computergestützte Proteinstrukturvorhersage Strukturmodelle der Proteinkomplexe von CFII, CstF und dem Endonuklease-Komplex zu erstellen. Darüber hinaus wurden die rekombinanten Proteinkomplex in pulldown-Experimenten genutzt, um unbekannte Proteine und Interaktionspartner zu identifizieren. Hierbei konnte viele an der mRNA-Prozessierung, -Qualitätskontrolle und -Export beteiligten Proteinkomplexe erfasst werden.

During maturation of mRNA, it is cleaved at the 3' end and polyadenylated. This process is catalyzed by a multiprotein complex. In this work, the previously known protein complexes involved in mRNA 3' processing were purified, biochemically characterized, and structurally investigated by cross-linking and mass spectrometry. The structural information obtained was used to generate structural models of the protein complexes of CFII, CstF, and the endonuclease complex by computer-assisted protein structure prediction. Also, the recombinant protein complexes were used in pulldown experiments to identify unknown proteins and interaction partners. Here, many protein complexes involved in mRNA processing, quality control, and export could be detected.