Induktion einer ATP-Sekretion über Volumen-sensitive Anionenkanäle durch Sphingosin-1-phosphat in RAW-Makrophagen

Abstract

Diese Arbeit untersucht den Einfluss des Lipidmediators Sphingosin-1-phosphat auf RAW-Makrophagen. Elektrophysiologische Ganzzellanalysen zeigten, dass Sphingosin-1-phosphat (S1P) in nanomolaren Konzentrationen eine Ionenleitfähigkeit mit moderater Auswärtsgleichrichtung in RAW-Makrophagen hervorruft. Analysen des Umkehrpotentials legen nahe, dass die beobachteten Ströme durch Anionen getragen werden. Die Ströme sind sensitiv auf Veränderungen der intra- und extrazellulären Osmolarität. Das pharmokologische Profil der Ströme legt nahe, dass diese durch Volumen-sensitive Anionenkanäle (VSOR-Kanäle) getragen werden. Weitergehende pharmakologische Analysen ergaben eine Beteiligung des G-Protein-gekoppelten S1PR1 und des Zytoskeletts an der Aktiviterung der Ströme. Zudem wurde gezeigt, dass S1P über VSOR-Kanäle eine konduktive ATP-Sekretion vermittelt.

In this thesis, the activation of outwardly rectifying anion currents by sphingosine-1-phosphate (S1P) in the murine macrophage cell line RAW 264.7 is reported. The S1P-induced current is mainly carried by anions. The sensitivity of the currents to changes in intra- and extracellucar osmolarity and the pharmacological profile suggest an involvement of volume-regulated anion channels (VRAC). S1P acts via the G-protein-coupled S1P receptor 1 (S1PR1) to activate the current. Further analysis shows that the actin cytoskeleton is involved in the stimulation of VRAC. S1P and hypotonic extracellular solution induced secretion of ATP from the macrophages, which in both cases was blocked in a similar way by typical VRAC blockers. Thus it is assumed that the S1P-induced ATP secretion in macrophages is a conductive process via volume-regulated anion channels.