Detektion und Charakterisierung von MDMX-Isoformen in humanen Ovarialtumoren

Abstract

In dieser Arbeit wurde in einem Kollektiv von 34 postoperativ eingefrorenen ovariellen Tumorproben die Expression von MDMX-Transkripten untersucht. In 16 der 34 Tumorproben konnten zusätzlich zur bereits charakterisierten Variante MDMX-S zahlreiche neue MDMX-Transkriptvarianten identifiziert werden. Die Expression einer Isoform mit intaktem RING-Finger (MDMX-211) in MCF-7 Zellen (Wildtyp-p53) führt zu einer Stabilisierung von p53 und anschließend zu einer verstärkten p21-Expression. Die Behandlung der Zellen mit cis-Platin hat ein vermindertes p21-Level zur Folge, das durch die Einleitung der Apoptose erklärbar ist. Im Gegensatz dazu hat die Expression der Spleißvariante MDMX-Var6 mit intakter p53-Bindungsdomäne keinen Einfluss auf das p21-Level in MCF-7 Zellen. In Folge der cis-Platin-Behandlung der Zellen kommt es zu einem stärkeren Anstieg von p53. Dies ist jedoch transkriptionell inaktiv, da es nicht zur p53-vermittelten Aktivierung des p21-Promotors kommt.

In this study, we screened 34 snap frozen ovarian tumour samples for MDMX splice variants. In addition to MDMX-S, we identified numerous new MDMX transcripts in 16 of the 34 tumour samples. Two representatively chosen isoforms were characterized in more detail. We found that expression of the splice variant MDMX-211 – containing the complete RING-finger domain – in MCF-7 cells (wild-type p53) resulted in the stabilization of p53 and subsequently in the p53-mediated expression of p21. After treatment of these cells with cis-Platinum, a significant decrease of the p21-level was observed, suggesting a switch from cell cycle regulation to apoptosis. In contrast, the splice variant MDMX-Var6, with a complete p53-binding domain, does not have any impact on p21 expression. After addition of cis-Platin we observed complete suppression of the p53 induced p21 expression despite a strong increase of the p53-levels.