Untersuchungen zur Rolle des Transkriptionsfaktors ONECUT 2 in Hodgkin-Lymphomzellen

Abstract

Das Hodgkin-Lymphom (HL) ist eine maligne Erkrankung des lymphatischen Systems. Bei der Etablierung einer cDNA-Bank aus chemoresistenten HL-Zellen wurde eine neue Splicevariante des Transkriptionsfaktors ONECUT2 (OC2) entdeckt und als ONECUT2s (OC2s) bezeichnet. Inwiefern OC2 und die neue Variante OC2s eine Rolle beim HL spielen, ist Gegenstand dieser Arbeit. OC2 und OC2s wurden mittels quantitativer RT-PCR in Tumorzelllinien, Gewebearten und transgener Zellen analysiert. Die differentielle Genexpression wurde durch RNAseq bzw. MicroArray-Technik untersucht. Auf Proteinebene wurden Durchflusszytometrie, Immunfluoreszenzfärbung und Westernblot-Analysen durchgeführt. Insbesondere bei HL-Zellen zeigte sich eine hohe simultane Expression der beiden Varianten. Verschiedenen Gene werden durch OC2 und OC2s in ihrer Expression durch beeinflusst. Insbesondere zeigte sich eine Korrelation der Expression von OC2 und dem endogenen Retrovirus ERV-FC1 in HL-Zellen.

Hodgkin lymphoma (HL) is a malignant disease of the lymphatic system. Analyzing a cDNA-library from chemo-resistant HL cells, we identified a new splice variant of the transcription factor ONECUT2 (OC2), which we named ONECUT2s (OC2s). The aim of the project was to uncover the function of the two variants OC2 and OC2s in HL. For the quantitative expression analysis of OC2 and OC2s at the RNA level, we performed qRT-PCR on different tissue samples, cell lines and transgenetic cells. Westernblot, immunofluorescence staining and flow cytometry were used for detection of OC2 and OC2s at protein level. Gene expression profiles of transgenic cells were analyzed via RNAseq and MicroArrays. We observed high expression of OC2 and OC2s in HL cell lines. Both variants had impact on the gene expression profile of transgenic cells. Interestingly, we found a correlation between OC2 and the endogenous retrovirus ERV-FC1 in HL cells.