Entwicklung eines geeigneten Modells zur Untersuchung des selektinvermittelten Zellrollens: das Chorioallantoismembran (CAM)-Modell

Abstract

Die Selektine spielen bei Entzündungsprozessen eine bedeutende Rolle. Zur Untersuchung der Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen wurde die Chorioallantoismembran (CAM) des Hühnerembryos als in-vivo Modell verwendet. Nach vielen Modifizierungen der ursprünglichen Technik wurden ausreichend hohe Überlebensraten der Embryonen erzielt und eine neue Injektionstechnik entwickelt. Es wurden FITC-Partikel (Fluoreszierende Carboxylierte Mikropartikel), CHO-Zellen (Chinesische Hamsteovar-zellen), CHOE-Zellen ( + E-Selektin), U937-Zellen, mit P-Selektin beschichtete FITC-Partikel sowie hühnereigene Leukozyten injiziert und deren intravasales Verhalten kinematografisch verfolgt. CHO- / CHOE- und U937-Zellen eigneten sich aufgrund der starken Adhärenz der Zellen nicht für differenzierte Geschwindigkeitsbestimmungen. Es konnte gezeigt werden, daß sich die mit P-Selektin beschichteten FITC-Partikel bereits ab dem 7. Entwicklungstag signifikant langsamer bewegten als die Kontrollpartikel. Adulte Hühnerleukozyten ähnelten in ihrem intravasalen Verhalten den FITC-Partikeln und sind für in-vivo Untersuchungen gleichfalls gut geeignet. Der erstellte Fotoatlas gibt eine Übersicht über die Entwicklungsstadien der Embryonen und ordnet jedem Stadium von Hamburger-Hamilton die zugehörige CAM bei der Kultivierung in der "Spiegeleikultur" zu.

The selectins play an important role in inflammatory processes. To investigate their receptorligand-interactions the chorioallantoismembrane (CAM) of the chick embryo was used as invivo modell. After many modifications there was aimed a sufficient survival rate of the embryos and a new technique of injection was developed. We injected FITC-particles (fluorescent carboxylated microspheres), CHO-cells (chinese hamsterovar-cells), CHOE-cells (+E-selectin), U 937-cells, FITC-particles covered with P-selectin as well as chick leukocytes and investigated their intravasal movement. Because of their adhesion CHO- / CHOE- and U937-cells were less qualified for measurements of their velocities. It could be shown that the particles covered with P-selectin moved significant slowlier already from the 7 th day of incubation than the particles of the control group. Adult chick leukocytes resembled the FITC-particles in their intravasal movement and are suitable for in-vivo investigations. The photo atlas presented in this work shows the stages of the embryos and assigns to every stage of Hamburger-Hamilton the accompanying CAM during cultivation in a shell-less culture.