Please use this identifier to cite or link to this item:
http://dx.doi.org/10.25673/3577
Full metadata record
DC Field | Value | Language |
---|---|---|
dc.contributor.author | Parthier, Christoph | - |
dc.date.accessioned | 2018-09-24T13:58:54Z | - |
dc.date.available | 2018-09-24T13:58:54Z | - |
dc.date.issued | 2005 | - |
dc.identifier.uri | https://opendata.uni-halle.de//handle/1981185920/10362 | - |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.25673/3577 | - |
dc.description.abstract | WW-Domänen sind kleine, etwa 30-40 Aminosäuren umfassende Proteindomänen, deren Bezeichnung sich von zwei konservierten Tryptophanresten ableitet. Durch Bindung an prolinreiche Sequenzen vermitteln sie Protein-Protein-Wechselwirkungen im Kontext zahlreicher zellulärer Prozesse. In der vorliegenden Arbeit wird die Entwicklung eines Verfahrens zur Kopplung von rekombinanten Proteinen beschrieben, die durch genetische Fusion mit der ersten WW-Domäne (WW1) des humanen Formin-bindenden Proteins 11 (FBP11) bzw. einer prolinreichen Sequenz mit einem PPLPP-Motiv spezifisch aneinander assoziiert werden können. Anhand von Cystein-Varianten von WW-Domäne und Ligand wird eine kovalente Stabilisierung dieses Komplexes in Form einer intermolekularen Disulfidbrücke bewerkstelligt. Die Effizienz und allgemeine Anwendbarkeit des Verfahrens konnte anhand einer modellhaften Kopplung von rekombinanter Glutathion-S-Transferase (GST) und dem grün fluoreszierenden Protein (GFP) demonstriert werden. Außerdem wurde die NMR-Struktur von der isolierten Domäne FBP11-WW1 im ungebundenen Zustand und im Komplex mit dem von Formin abgeleiteten Peptid APPTPPPLPP bestimmt. In Kombination mit einer Reihe von Fluoreszenz- und SPOT-Bindungsstudien konnte damit die strukturelle Basis der PPLPP-Erkennung von WW-Domänen der Klasse II aufgeklärt werden. | - |
dc.description.abstract | WW domains are small protein modules named after two conserved tryptophan residues that mediate protein-protein interactions in a wide range of cellular processes by binding to prolinerich sequences. Here the development of a method is described to couple recombinant proteins in vitro which have been fused to the first WW domain of the human Formin Binding Protein 11 (FBP11-WW1) and a proline-rich sequence containing a PPLPP-motif, used as binding adapters. Thus the directed association of target proteins is mediated by the affinity of the fused modules. By the insertion of a cystein residue into FBP11-WW1 and the ligand the association was covalently stabilized by an intermolecular disulfide bridge. The efficiency of this generally applicable system was demonstrated by the model coupling of recombinant Glutathion-Stransferase (GST) and Green Fluorescent Protein (GFP). Additionally the solution structure of the isolated FBP11-WW1 domain was solved in the unbound state as well as in complex with the peptide APPTPPPLPP, a sequence derived from Formin. In combination with fluorescence and SPOT binding measurements the structural basis of PPLPP-recognition by class II WW domains could be elucidated. | eng |
dc.description.statementofresponsibility | von Christoph Parthier | - |
dc.format.extent | Online-Ressource, Text + Image | - |
dc.language.iso | ger | - |
dc.publisher | Universitäts- und Landesbibliothek Sachsen-Anhalt | - |
dc.rights.uri | http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/ | - |
dc.subject | Elektronische Publikation | - |
dc.subject | Zsfassung in engl. Sprache | - |
dc.title | Entwicklung eines Protein-Kopplungsverfahren basierend auf WW-Domänen | - |
dcterms.type | Hochschulschrift | - |
dc.type | PhDThesis | - |
dc.identifier.urn | urn:nbn:de:gbv:3-000008083 | - |
local.publisher.universityOrInstitution | Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg | - |
local.subject.keywords | WW-Domänen, Klasse II, prolinreiche Sequenz, Polyprolin, FBP11, Formin, Proteinkopplung, Heterodimer, Disulfidbrücke, Proteinassoziation, Proteindesign, NMR-Struktur, rekombinant | - |
local.subject.keywords | WW domains, class II, proline-rich sequence, poly-Proline, FBP11, Formin, protein coupling, heterodimer, disulfide bridge, protein association, protein design, NMR, solution structure, recombinant | eng |
local.openaccess | true | - |
dc.identifier.ppn | 483392758 | - |
local.accessrights.dnb | free | - |
Appears in Collections: | Hochschulschriften bis zum 31.03.2009 |