Immortalisierung primärer humaner mesenchymaler Stromazellen als erster Schritt bei der Aufklärung pathogenetischer Mechanismen der Entstehung von Desmoiden

Abstract

Mediatoren von Wundheilungsreaktionen könnten prämaligne MSC in einen transformierten Zustand versetzen und zur Entwicklung von Desmoiden beitragen. Neben dem bei FAP-Patienten konstitutiv aktivierten Wnt Signalweg kommt ein Synergismus mit dem durch TGF-β-vermittelten, wundheilungsbedingten Proliferationsstimulus für mesenchymale Zellen als Ursache in Frage. In vitro lassen sich primäre MSC nur kurz kultivieren. SV-40 Large-T Antigenkann zelluläre Apoptosevorgänge hemmen oder unterbinden. Als Beitrag zur Aufklärung einer möglichen Pathogenese wurden im Rahmen dieser präklinischen Studie MSC mittels eines lentiviralen Expressionssystems stabil mit LT-Ag transduziert, um einer onkogen induzierten Seneszenz vorzubeugen. Die resultierenden transgenen Zelllinien erreichten signifikant höhere kumulative PD als ihre Ursprungszellen. Die LT-positiven MSC wiesen in Bezug auf die für MSC charakteristischen Oberflächenmarker und das Ansprechen auf übliche Differenzierungsprotokolle keine relevanten Unterschiede zu den Ursprungszellen auf. Eine maligne Transformation der transgenen MSC wurde ausgeschlossen.

Mediators of wound healing response are suspected to put premalignant MSC in a transformed state and contribute to the development of desmoids. In addition to the Wnt signalling, constitutively activated in FAP patients, a synergism with the wound healing induced proliferation stimulus for mesenchymal cells, mediated through TGF-β, would present a possible explanation. In vitro, primary MSC can be cultivated only for a short period of time. SV-40 large T antigen may inhibit or prevent cellular apoptosis processes. As a contribution to a better understanding of the possible pathogenesis,in this preclinical study, MSC were stably transduced with LT-Ag using a lentiviral expression system to prevent an oncogenic-induced senescence. The resulting transgenic cell lines have significantly higher cumulative PD as their origin cells. The LT-positive MSC did not show any significant differences compared to the cells of origin concerning the characteristic surface markers of MSCand their response to standard differentiation protocols. A malignant transformation of transgenic MSC was excluded.